关于样本的保存和前处理

血液样本

对于基因组DNA提取，一旦样本冻存后要尽量避免反复冻融，防止DNA发生断裂，片段变小等。对于RNA提取，建议尽快提取后保存RNA，或用血液RNA稳定剂保存。血凝块需要在提取前充分液化。血清血浆中提取的大多是游离核酸，需要有助沉剂的帮助。鸟类和两栖类的红细胞是有核细胞，一般5-10μl就足够了。

新鲜组织样本

样本在2～8℃可保存1个月；在－20℃或-70℃可长期保存。

在福尔马林中固定时间过长或样本存放时间过久（＞1年）易导致DNA完整性受损。用 PBS 涡旋振荡洗涤3次，再进行提取。

石蜡包埋组织样品

样本要尽快在福尔马林中固定。最佳保存温度为2-8℃，建议保存不超过3年。如需提取RNA，则样本保存时间一般不超过1年。石蜡样本经二甲苯脱蜡后提取核酸。

干血斑和口腔拭子

在DNA提取时，样本可干燥后于-20℃保存1年。对于RNA提取，应尽快提取后保存RNA。样本提取前，将拭子浸泡于生理盐水或缓冲液中反复漂洗几次，离心后得到沉淀再进行核酸提取。

体液样本

可直接离心获得沉淀，提取沉淀物核酸。

粪便样本

室温保存长达2周的粪便样本，其内部的微生物结构群落保存完好。对于冻存的粪便样品应避免反复冻融。

关于样本的提取

       不同提取方法的对比：沉淀法的优点是体积灵活，但纯度较离心柱法略低；柱法提取纯度高，杂蛋白等抑制物少，但是对样本起始量有限制；磁珠法可配合仪器或手动操作，操作简便。手动操作时，微量样本得率较高。

关于核酸的鉴定

DNA的评价

OD₂₆₀/ OD₂₈₀ < 1.7，有蛋白的污染

OD₂₆₀/ OD₂₈₀＝1.7～1.9，纯度很好

OD₂₆₀/ OD₂₈₀ > 1.9，有部分降解或有RNA污染

RNA的评价

OD₂₆₀/ OD₂₈₀＝1.9～2.1，代表高纯度的RNA

OD₂₆₀/ OD₂₈₀ < 1.9，表明有蛋白质残留

OD₂₆₀/ OD₂₈₀ > 2.1，表明RNA有部分降解

一些常见问题

       得率和纯度不高时的可能问题和优化方法：材料应尽量使用新鲜幼嫩的组织，并避免在裂解前发生冻融。样本量与裂解液的量要对应。不要剧烈操作，纯化过程中充分洗涤。 

       酶切或PCR反应受抑制有可能是提取的DNA杂质太多，样本起始量大和纯化不彻底造成的杂质多也会影响到酶的活性。 

       RNA在提取过程中需去除RNA酶的污染，单独设立RNA提取实验室或提取区域，台面、离心机以及移液器等必须做无RNase处理，操作过程中避免干扰。塑料器皿可用0.1%DEPC水浸泡4-10小时，再灭菌；玻璃器皿可在180℃烘烤4小时；塑料制品和枪头避免交叉污染。